简述基因工程操作的主要步骤。

(1)【◆题库问题◆】：[问答题] 简述基因工程操作的主要步骤。

【◆参考答案◆】：
（1）采用酶切cDNA文库人工合成或PCR扩增，分离制取目的基因片段，（2）采用核酸限制性内切酶Ⅱ同时剪切目的基因和克隆载体，（3）在T4DNA连接酶的作用下将目的基因与基因载体连接成重组DNA，（4）把重组DNA分子导入受体细胞，并在一起扩增而成克隆子，（5）标记分析和筛选出获得重组DNA分子的克隆受体细胞，（6）进一步扩增、转化和表达，最终生成新的优良性状的菌种或人类所需要的产品

(2)【◆题库问题◆】：[填空题] 新鲜的果蔬的冷藏温度范围常控制在（），原因是抑制酶的活动和呼吸作用，延缓储备物质的分解，任何冰点相近的食品，当以不同冻结速度降至冻藏温度时，它们的（）应相同，食品冻结过程中（）速度和（）速度决定了冻结食品内溶质几何分布的程度。冻肉的食用品质常受着（）条件贮藏和（）等条件的影响。

【◆参考答案◆】：0～5℃；冷耗量；冻结层分解面；溶质扩散；冷冻；解冻

(3)【◆题库问题◆】：[填空题] 果蔬中的水分可分为（）水分和（）水分。

【◆参考答案◆】：自由；结合

(4)【◆题库问题◆】：[单选] 在生物技术发展中的重大历史事件中，下列哪件开创了现代生物技术产业发展的新纪元（）。
A．应用动物胚胎移植技术进行牛胚胎移植
B．应用重组DNA技术进行新药的开发
C．应用重组人胰岛素技术治疗糖尿病
D．利用基因工程菌生产凝乳酶

【◆参考答案◆】：B

(5)【◆题库问题◆】：[名词解释] 集中腐蚀

【◆参考答案◆】：指在罐内壁某些局部面积内出现的铁的腐蚀现象。

(6)【◆题库问题◆】：[问答题,简答题] 什么是细菌生长曲线？可分为哪几个阶段？各有什么特点？

【◆参考答案◆】：将细菌接入一定量的液体培养基中，置适温下培养，每隔一定时间，取样测其活菌数。以培养时间为横座标，以活菌数的对数为纵座标，绘制而成的曲线称细菌生长曲线。根据细菌生长速率常数的不同，一般可把细菌的典型生长曲线粗分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期等四个时期。延迟期的微生物菌体内物质量显著增长，菌体体积增大；代谢活跃，细胞生长速度逐渐加快；对外界不良环境条件的反应敏感。对数期细胞数以几何级数增加的阶段。稳定期细菌分裂速度降低，繁殖率和死亡率逐渐趋于平衡，活菌数基本保持稳定。衰亡期营养缺乏、代谢废物堆积会使细菌死亡速度超过繁殖速度，活菌数明显下降，从而进入衰亡期。

(7)【◆题库问题◆】：[填空题] 从自然界中分离筛选菌种一般可分为（）（）（）（）等四个步骤。

【◆参考答案◆】：样品采集；增殖培养；纯种分离；性能测定

(8)【◆题库问题◆】：[填空题] 气调冷藏中，气体成分的调节方法主要有自然降氧法、（）、半自然降氧法和减压法。

【◆参考答案◆】：快速降氧法

(9)【◆题库问题◆】：[单选] 在一定条件下，并非所有细胞都能融合，当细胞融合后需进行融合子的筛选，有关融合子的筛选叙述错误的是（）。
A．微生物细胞融合子的筛选一般通过两亲本遗传标记的互补而得以识别
B．植物细胞融合子的筛选常用两亲本原生质体的形状和结构的差异而得以识别
C．动物细胞融合子筛选通常是应用选择性培养基使亲本细胞死亡而让杂种细胞存活下来
D．植物细胞原生质体和微生物原生质体的制备过程因结构不同而差异较大

【◆参考答案◆】：D

(10)【◆题库问题◆】：[多选] 生物技术的主要内容包括（）
A．基因工程
B．细胞工程
C．酶工程
D．发酵工程

【◆参考答案◆】：A, B, C, D